FROTIS

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.

Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

TINCION

Desarrollo

Mecanismos de Coloración
La coloración celular y tejidos son una combinación de fenómenos físicos y químicos de absorción: los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican que hay reacción química.

Los Colorantes
Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.

Preparación de Frotis Bacteriano para Coloración
Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias químicas o por el calor moderado.

Tinciones
Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.

Tipos de Tinción

Tinción Simple: utiliza un solo colorante.

Tinción de Gram:Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)

Tinción Ácido Resistente:Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.

Tinción de Giensa:El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias núcleos de la células.

Tinción de Esporas:Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.Tinción de Cápsula:Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados creando resistencias.

Tinción de Flagelos:Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.

Endósporas:Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la célula los cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida.
Las esporas pueden situarse en el centro de la célula o en situaciones excéntricas cerca de un extremo de la misma.

Levaduras:Son esféricas, elípticas y cilíndricos, su tamaño varía notablemente. Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular.

Las Cápsulas:Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las células de algunas especies.

Sarcina:Son anaerobios obligados y son extremadamente ácido – tolerantes que pueden fermentar azúcares y crecer a pH inferior a 2.
Este género comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una célula.


Bacillus Cereus:La mayoría se encuentra en el suelo o en partículas de polvo en suspensión y son uno de los organismos del género Bacillus que pueden ser aislados fácilmente.Puesto que los formadores de esporas pueden aislarse selectivamente a partir del suelo, alimentos o de otro material dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos.
Los bácillus suelen crecer en medios sistemáticos que contengan azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes, etc, como única fuente de carbono y amoníaco como única fuente de nitrógeno.

Medios de Cultivo

Medio de cultivo
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientesque en concentraciones adecuadas y en condicionesfísicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.Estos medios son esenciales en el Laboratoriode Microbiología por lo que un control en sufabricación, preparación, conservación y uso, asegurala exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de losresultados obtenidos.

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:

Medios naturales o complejos.


Constituidos porsustancias complejas de origen animal o vegetal,las que son usualmente complementadas por laadición de minerales y otras sustancias. En ellosno se conocen todos los componentes ni las cantidadesexactas presentes de cada uno de ellos.



Medios definidos o sintéticos.


Son los medios que tienen una composición químicadefinida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos deinvestigación.



De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

Medios selectivos.

Son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian porser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismosespecíficos

Medios de enriquecimiento.

Son medios líquidos que favorecen el crecimientode un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número demicroorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustanciasinhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los quese quieren cultivar.

Bacterias

Proteus

Proteus es un genero de bacterias gramnegativas, que incluye patógenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario. Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa por razón de tener una β galactosidasa, pero algunas se han mostrado capaces de hacerlo en el test TSI. Tienden a ser organismos pleomórficos, no esporulados ni capsulados y son productoras de fenilalanina desaminasa.
Crecen en medios corrientes y moderadamente selectivos a temperatura corporal de 37ºC. Crecen formando capas diseminadas por virtud de su gran motilidad. Existen variantes inmóviles que forman colonias lisas.
Hay tres especies que causan infecciones oportunistas en el hombre: P. vulgaris, P. mirabilis, y P. penneri. Causan infecciones urinarias (más del 10% de complicaciones del tracto urinario incluyendo cálculos y lesiones celulares del epitelio renal).

Escherichia Coli

Escherichia coli (E. coli) es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán.
Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaeróbico facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.
E. coli, en su hábitat natural, vive en los intestinos de la mayor parte de mamíferos sanos. Es el principal organismo anaerobio facultativo del sistema digestivo. En individuos sanos, es decir, si la bacteria no adquiere elementos genéticos que codifican factores virulentos, la bacteria actúa como un comensal formando parte de la flora intestinal y ayudando así a la absorción de nutrientes. En humanos, E. Coli coloniza el tracto gastrointestinal de un neonato adhiriéndose a las mucosidades del intestino grueso en el plazo de 48 h después de la primera comida.

Brucella Abortus

Brucella es un género de bacterias Gram negativas. Son cocobacilos pequeños (0,5-0,7 por 0.6-1.5 µm), no-móviles y encapsulados.
Brucella es la causa de la brucelosis, una verdadera enfermedad zoonótica. Es transmitida por la ingestión de comida infectada, contacto directo con un animal infectado o por inhalación de aerosoles. La exposición infecciosa mínima está en 10-100 organismos. La brucelosis se produce principalmente por exposición ocupacional (por ejemplo, exposición al ganado, ovejas, cerdos), pero también por el consumo de productos lácteos no pasteurizados.
Brucella se aisla de cultivos sobre un medio de sangre. Puede requerir una incubación prolongada (hasta 6 semanas) puesto que son organismos de crecimiento lento, pero sobre las máquinas automáticas modernas, los cultivos a menudo pueden ser positivos en siete días. Mediante la tinción de Gram aparecen como densas aglomeraciones de cocobacilos Gram-negativos.

Paramesium

Los paramecios son protozoos ciliados con forma de suela de zapato o eclipsoide, abunda en lagos, estanques y charcos. Se mueve constantemente, para lo cual se sirve de innumerables hebras microscópicas llamadas cilios, con los que golpea el agua a modo de remos. Los paramecios se alimentan de bacterias y otros organismos microscópicos. Para atrapar su alimento, utilizan una boca en forma de ranura.
Son probablemente los seres unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la ciencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de apenas 0.05 milimetros.
La membrana externa absorbe y expulsa regularmente el agua del exterior con el fin de controlar la osmorregulación, proceso dirigido por dos vacuolas contráctiles.
En su anatomía destaca el citostoma, una especie de invaginación situada a todo lo largo del paramecio de la que éste se sirve para capturar el alimento, conformado por partículas orgánicas flotantes y microorganismos menores.

Salmonella

Es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.
Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.
Con importancia clínico epidemiológica, las más de 2000 serovariedades de Salmonella pueden agruparse en tres divisiones ecológicas (spp. son subespecies):-Salmonella spp. adaptadas a vivir en el ser humano, entre ellas, S. typhi, S. paratyphi A, B y C;-Salmonella spp. adaptadas a hospederos no humanos, que circunstancialmente pueden producir infección en el hombre, entre ellas, S. dublin y S. cholerae-suis;-Salmonella spp. sin adaptación específica de hospedero, que incluye a unas 1800 serovariedades de amplia distribución en la naturaleza, las cuales causan la mayoría de las salmonelosis en el mundo.

Introduccion.
Esta es la segunda practica que realizaremos se llama pesos y medidas y pesaremos objetos con una balanza granataria.

Objetivo.
El objetivo de esta practica es aprender a utilizar la balanza granataria pesando en ella instrumentos del laboratorio.

Desarrollo.
Nuestra mesa de trabajo tuvo que realizar la segunda practica llamada pesos y medidas.
En esta practica tuvimos que pesar los siguientes objetos:

-Espatula
-Bazo de precipitado de 50 ml y 500 ml
-Cristalizador
-Caja Petri
-Matraz
-Placa Escabada
-Pipeta Pasteur
-Pipeta graduada100ml
-pipeta graduada 10ml., 5 ml , 1/100ml
-Vidrio de Reloj-Pipeta Automatica
-Medio de Cultivo.

De los cuales surgieron los siguientes pesos:

Caja petri : 36 gr
Pipeta : 15.2 gr
Matraz: 131.7 gr
Pipeta Pasteur Corta : 3.1gr
Pipeta Graduada : 109.9 gr
Pipeta pasteur Larga : 3.2 gr
Vaso de precipitado : 122.9 gr
Pipeta de 1/100 : 2.9 gr
Vidrio de reloj : 18.6 gr
Cubeta para reactivo de rotor
Quimica seca (Monarca): .9 gr

Problema:
1 Caja petri le caben 19 ml ¿Cuanto le caben a 7 Cajas Petri?
1000 ml x Cajas
19 ml 7 Cajas

19
x7
____
133
1000 ml ---31 gr
131ml ----X gr

X=(133 ml )(31 gr)
____________ = 4.123 gr
(1000 ml)

Practica 1

Enfoque

Introduccion

En esta practica realizaremos enfoques con el microscopio optico con el fin de aprender a utilizarlo.

Objetivo

El objetivo de esta practica es aprender a utilizar el microscopio optico y aprender a enfocar con los objetivos que contiene.

Microscopio Optico

Enfoque

Nuestra mesa de trabajo tuvo que realizar una practica llamada enfoque, en la cual tuvimos que trabajar y usar nuestro equipo de bioseguridad para estar seguros y protegidos. Trabajamos con el microscopio optico utilizando como objetivo la Camara de Neubauer.

El objetivo era localizar unas lineas en forma de cuadricula localizadas en la camara de neubauer.

Cada integrante de nuestra mesa de trabajo tardo de 10 a 15 minutos en encontrar dichas lineas.Por ul timo tuvimos que anotar los materiales que utilizamos en un vale de materiales.

Conclucion

Aprendimos a enfocar y utilizar el microscopio optico .Demanera adecuada para poder utilizarlo.

Valores y Conceptos

Responsabilidad
Responsable es aquel que conscientemente es la causa directa o indirecta de un hecho y que, por lo tanto, es imputable por las consecuencias de ese hecho

Ayuda
es cualquier tipo de cooperacion.

Diagnostico
el diagnostico es el procedimiento por el cual se identifica una emfermeda

Como impacta la actitud
la actitud tiene un gran impacto por que sin ella no tuvieramos valor de realizar una actividad.

Reconocer Causas
Hay que reconocer nuestras causas por ejemplo : ay que reconocer si no te nemos la razon o si hacemos algo igual.

Poner en claro los valores
pues tenemos que implantar a cada dia los valores por que son fundamentales en nuestra vida diaria ya que sin ellos no seriamos respetados . Ay que aplicar los valores diariamente .

Remplazar lo nuevo por lo viejo
Tenemos que remplazar, por ejemplo: si estoy reprobando una materia tengo que cambiar mi forma de estudio y remplazarlo.