Practica 6 y 7 TINCION DE GRAM

Una ves puesto el campo de esterilizacion, se nos fue entregando el frotis ya antes realizado, ahora tubimos que colocar la preparacion fijada con l

a solucion de cristal violeta durante 1m,

despues lo dejamos escurrir y luego lo metemos en yodo durante 1m,

despues que haya pasado el minuto lo lavamos con alcohol

y se mete en la otra solucion durante 30 seg, una ves echo eso lo dejamos secar y le ponemos una gota de aceite de imercion.

Y por ultimo lo observamos por el microscopio.

Practica 5 FROTIS

Con el asa bactereologica se va a desarrollar un frotis en un portaobjetos de cristal.

Se toma el asa bactereologica se pone en la flama del mechero dejandola al rojo vivo para que se esterilize, se retira del fuego se toma una pequeña gota de agua destilada, con ella misma se extrae una muestra del material bactereologico que crecio en las cajas petri.

Una vez teniendo ese material en el asa de acude a ponerlo en el portaobjetos en la parte central desplazando de izquierda a derecha el material bactereologico hasta que nos quede delgada, una vez teniendola verificamos si ya esta lista para el frotis de la muestra del cultivo.
ya realizado el frotis se fija de forma directa, se toma el porta de sus partes laterales a lo largo para su transporte.

Por ultimo, se toma el porta de forma lateral para pasarlo por la flama nunca se debe dejar de forma directa en la flama.una vez fijado el frotis queda listo para el proceso de tincion.

Practica 4 Observacion Macroscopica

En esta practica anotare, una observacion al medio de cultivo Mac Conkey.
Se anotara todo lo que vea en el medio de cultivo.

En el medio de cultivo se notan unos pequeños puntos como de color cafe.
Tiene presencia de vapor y olor a orina. Esto sucedio alrededor de 24 Horas.

Practica 3 Siembras

SIEMBRAS EN MEDIO DE CULTIVO
El alumno debe realizar una siembra en medio de cultivo de forma estriada, variada y aplicando el nombre de cada una de las que se dieron.

Materiales:
-5 o 7 cajas petri de medio de cultivo.
-Asa bacteriologica
-Vaso de precipitado con 25ml. de agua destilada.
-2 mecheros de bunsen
-Papel para mesa de laboratorio
-Tape
-Algodon secoAlgodones con alcohol
-Tubo conico de plastico
Muestras para siembras:
-Saliva
-Muestra interdental
-Orina
-Agua preparada
-Verduras
-Muestra de sangre
Tecnica de extraccion sanguinea:
Materiales:
-Jeringa 5ml.
-Torundas de algodon alcoholosadas
-Torniquete

Muestra Interdental

Con los isopos se toma una muestra de todos los dientes.
Se coloca el medio de cultivo en la zona esterilizada con los mecheros de bunzen y se aplica la muestra en el medio de cultivo.

Practica 1 y 2 Elaboracion de Medio de Cultivo y Esterilizacion

MEDIO DE CULTIVO

Se debe solicitar en el laboratorio un formato para anotar los materiales que se utilizaran en la elaboracion de un medio de cultivo. Los cuales fueron:

7 Cajas Petri
Matraz Erlenmayer
2 Mecheros de Bunzen
Vidrio de Reloj
Agar de Mac Conkey
Varilla de Cristal
Vaso de Precipitado


El alumno debe de tener su equipo de bioseguridad completo.
Vestir la mesa de laboratorio con papel blanco.
Una o dos personas deben rebicizar que este activada la linea de gas l.p. conectar los mecheros y abrir las balbulas.
Habilitar el equipo de esterilizacion "autoclave" en el cual se debe introducir agua destilada para llevar a cabo la esterilizacion por calor humedo.

Se debe pesar en la balanza granataria el contenido en gramos dependiendo de las cajs petri solicitadas siguiendo las indicaciones que contiene el medio.
Se ocupa rehidratar el contenido del polvo para las 5 o 7 cajas y este se mezclara en el contenido de agua destilada que se requiera para las cajas solicitadas. El polvo se mezclara con agua en el vaso de precipitado para mezclar se utilizara una varilla de cristal como agitador cuidando que no se tengan grumos en el vaso.
SE deben llevar los tiempos de trabajo y acomodarlos en un formato como bitacora.
Una vez reposado el medio de cultivo se expone al fuego del mecher hasta dejar que se presente la ebullicion.
Una vez que se presento la ebullicion se deja enfriar y reposar para taponear y colocarlo en la autoclave.
Aplicar tecnica de esterilizacion

BITACORA

Libro en el que se lleva la cuenta y razón de los sucesos que tuvieron lugar durante un periodo determinado.

El mantenimiento correctivo o mantenimiento por rotura.
Este mantenimiento agrupa las acciones a realizar ante un funcionamiento incorrecto, deficiente o incompleto que por su naturaleza no pueden planificarse en el tiempo.

Mantenimiento preventivo
Es una actividad programada de inspecciones, tanto de funcionamiento como de seguridad, ajustes, reparaciones, análisis, limpieza, lubricación, calibración, que deben llevarse a cabo en forma periódica en base a un plan establecido. El propósito es prever averías o desperfectos en su estado inicial y corregirlas para mantener la instalación en completa operación a los niveles y eficiencia óptimos.

ETAPAS

ETAPA PREANALITICA
En realidad se le ha prestado menos atención al establecimiento de las medidas de control de la calidad en las etapas de obtención, procesamiento y almacenamiento de las muestras que al resto del procesamiento analítico.
En la hemostasia, la etapa preanalítica es una etapa clave, y de ella depende en gran medida el resultado final. Los objetivos de las normas de control de la calidad en la fase preanalítica son:La correcta identificación del paciente, del solicitante y de la prueba solicitada.Reducir al máximo la variabilidad intraindividual de los parámetros a medir.
Evitar el deterioro de la muestra mediante los procesos de obtención, manipulación transporte y conservación.

ETAPA ANALÍTICA
Este paso es clave en la Planificación Estratégica porque nos va a permitir conocer cuáles sonlos principales problemas con los que nos enfrentamos, y a partir de los cuales deberemosbuscar las soluciones específicas.
Requiere de un análisis realista, en él se basarán luego lasestrategias con las que se intentará revertir la situación apuntando al logro de los objetivospropuestos.En el análisis de las fortalezas y debilidades se deberán tener en cuenta los recursos humanos,tecnológicos, financieros, físicos y organizacionales. Será necesario analizar cada uno porseparado para determinar en cuáles nos vamos a apoyar.
La detección de las debilidadesservirá para elaborar las estrategias de planificación.Se requerirá creatividad a la hora de evaluar los recursos y no agotar las posibilidades en unmismo en el contexto más cercano.
Este es uno de los desafíos de la planificación.Los recursos humanos son las personas con las que trabajamos y las potencialidades ydebilidades que ellos y nosotros tenemos en la tarea.Los recursos tecnológicos son aquellos elementos con los que contamos para realizar mejornuestro trabajo.
Cuando podemos contar con ellos nos fortalecen, cuando no, significanverdaderos puntos débiles.

ETAPA POST-ANALITICA
Es la entrega de los resultados al paciente.

FROTIS

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.

Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

TINCION

Desarrollo

Mecanismos de Coloración
La coloración celular y tejidos son una combinación de fenómenos físicos y químicos de absorción: los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican que hay reacción química.

Los Colorantes
Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.

Preparación de Frotis Bacteriano para Coloración
Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias químicas o por el calor moderado.

Tinciones
Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.

Tipos de Tinción

Tinción Simple: utiliza un solo colorante.

Tinción de Gram:Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)

Tinción Ácido Resistente:Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.

Tinción de Giensa:El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias núcleos de la células.

Tinción de Esporas:Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.Tinción de Cápsula:Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados creando resistencias.

Tinción de Flagelos:Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.

Endósporas:Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la célula los cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida.
Las esporas pueden situarse en el centro de la célula o en situaciones excéntricas cerca de un extremo de la misma.

Levaduras:Son esféricas, elípticas y cilíndricos, su tamaño varía notablemente. Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular.

Las Cápsulas:Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las células de algunas especies.

Sarcina:Son anaerobios obligados y son extremadamente ácido – tolerantes que pueden fermentar azúcares y crecer a pH inferior a 2.
Este género comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una célula.


Bacillus Cereus:La mayoría se encuentra en el suelo o en partículas de polvo en suspensión y son uno de los organismos del género Bacillus que pueden ser aislados fácilmente.Puesto que los formadores de esporas pueden aislarse selectivamente a partir del suelo, alimentos o de otro material dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos.
Los bácillus suelen crecer en medios sistemáticos que contengan azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes, etc, como única fuente de carbono y amoníaco como única fuente de nitrógeno.

Medios de Cultivo

Medio de cultivo
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientesque en concentraciones adecuadas y en condicionesfísicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.Estos medios son esenciales en el Laboratoriode Microbiología por lo que un control en sufabricación, preparación, conservación y uso, asegurala exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de losresultados obtenidos.

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:

Medios naturales o complejos.


Constituidos porsustancias complejas de origen animal o vegetal,las que son usualmente complementadas por laadición de minerales y otras sustancias. En ellosno se conocen todos los componentes ni las cantidadesexactas presentes de cada uno de ellos.



Medios definidos o sintéticos.


Son los medios que tienen una composición químicadefinida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos deinvestigación.



De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

Medios selectivos.

Son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian porser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismosespecíficos

Medios de enriquecimiento.

Son medios líquidos que favorecen el crecimientode un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número demicroorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustanciasinhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los quese quieren cultivar.

Bacterias

Proteus

Proteus es un genero de bacterias gramnegativas, que incluye patógenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario. Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa por razón de tener una β galactosidasa, pero algunas se han mostrado capaces de hacerlo en el test TSI. Tienden a ser organismos pleomórficos, no esporulados ni capsulados y son productoras de fenilalanina desaminasa.
Crecen en medios corrientes y moderadamente selectivos a temperatura corporal de 37ºC. Crecen formando capas diseminadas por virtud de su gran motilidad. Existen variantes inmóviles que forman colonias lisas.
Hay tres especies que causan infecciones oportunistas en el hombre: P. vulgaris, P. mirabilis, y P. penneri. Causan infecciones urinarias (más del 10% de complicaciones del tracto urinario incluyendo cálculos y lesiones celulares del epitelio renal).

Escherichia Coli

Escherichia coli (E. coli) es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán.
Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaeróbico facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.
E. coli, en su hábitat natural, vive en los intestinos de la mayor parte de mamíferos sanos. Es el principal organismo anaerobio facultativo del sistema digestivo. En individuos sanos, es decir, si la bacteria no adquiere elementos genéticos que codifican factores virulentos, la bacteria actúa como un comensal formando parte de la flora intestinal y ayudando así a la absorción de nutrientes. En humanos, E. Coli coloniza el tracto gastrointestinal de un neonato adhiriéndose a las mucosidades del intestino grueso en el plazo de 48 h después de la primera comida.

Brucella Abortus

Brucella es un género de bacterias Gram negativas. Son cocobacilos pequeños (0,5-0,7 por 0.6-1.5 µm), no-móviles y encapsulados.
Brucella es la causa de la brucelosis, una verdadera enfermedad zoonótica. Es transmitida por la ingestión de comida infectada, contacto directo con un animal infectado o por inhalación de aerosoles. La exposición infecciosa mínima está en 10-100 organismos. La brucelosis se produce principalmente por exposición ocupacional (por ejemplo, exposición al ganado, ovejas, cerdos), pero también por el consumo de productos lácteos no pasteurizados.
Brucella se aisla de cultivos sobre un medio de sangre. Puede requerir una incubación prolongada (hasta 6 semanas) puesto que son organismos de crecimiento lento, pero sobre las máquinas automáticas modernas, los cultivos a menudo pueden ser positivos en siete días. Mediante la tinción de Gram aparecen como densas aglomeraciones de cocobacilos Gram-negativos.

Paramesium

Los paramecios son protozoos ciliados con forma de suela de zapato o eclipsoide, abunda en lagos, estanques y charcos. Se mueve constantemente, para lo cual se sirve de innumerables hebras microscópicas llamadas cilios, con los que golpea el agua a modo de remos. Los paramecios se alimentan de bacterias y otros organismos microscópicos. Para atrapar su alimento, utilizan una boca en forma de ranura.
Son probablemente los seres unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la ciencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de apenas 0.05 milimetros.
La membrana externa absorbe y expulsa regularmente el agua del exterior con el fin de controlar la osmorregulación, proceso dirigido por dos vacuolas contráctiles.
En su anatomía destaca el citostoma, una especie de invaginación situada a todo lo largo del paramecio de la que éste se sirve para capturar el alimento, conformado por partículas orgánicas flotantes y microorganismos menores.

Salmonella

Es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.
Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.
Con importancia clínico epidemiológica, las más de 2000 serovariedades de Salmonella pueden agruparse en tres divisiones ecológicas (spp. son subespecies):-Salmonella spp. adaptadas a vivir en el ser humano, entre ellas, S. typhi, S. paratyphi A, B y C;-Salmonella spp. adaptadas a hospederos no humanos, que circunstancialmente pueden producir infección en el hombre, entre ellas, S. dublin y S. cholerae-suis;-Salmonella spp. sin adaptación específica de hospedero, que incluye a unas 1800 serovariedades de amplia distribución en la naturaleza, las cuales causan la mayoría de las salmonelosis en el mundo.